天然二氢查尔酮类衍生物的合成及降糖活性筛选

刘福俊 王晓晶 王芳 王兴红 杨丽娟 黄超

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天然二氢查尔酮类衍生物的合成及降糖活性筛选

    作者简介: 刘福俊(1994−),女,云南人,硕士生,主要从事药物合成研究. E-mail:2414861145@qq.com;
    通讯作者: 王芳, wangfang@mail.kib.ac.cn ; 黄超, huangchao@ynu.edu.cn
  • 中图分类号: R914.5

Synthesis and hypoglycemic activity screening of natural dihydrochalcone derivatives

    Corresponding author: WANG Fang, wangfang@mail.kib.ac.cn ;HUANG Chao, huangchao@ynu.edu.cn
  • CLC number: R914.5

  • 摘要: 从天然二氢查尔酮降糖物质出发,设计合成二氢查尔酮类衍生物并筛选其降糖活性. 以廉价易得的苯甲醛、苯乙酮衍生物为原料,经两步反应制得14个二氢查尔酮类化合物(其中 6 个新化合物),其结构经1H NMR、13C NMR、HRMS及IR表征. 以胰岛素为阳性对照药,通过脂肪细胞模型葡萄糖消耗量试验检测目标化合物的降血糖活性. 研究结果显示,新化合物 4n 降血糖活性最为显著,其葡萄糖消耗量为4.64 mmol·L−1,与正常组相比提高了13.11%. 文章为探讨二氢查尔酮化合物的制备和降糖构效关系提供了实验基础.
  • 图 1  二氢查耳酮类降血糖药物及合成设计

    Figure 1.  Dihydrochalcone hypoglycemic drugs and its synthisis route design

    图 2  二氢查尔酮合成方法

    Figure 2.  Synthesis methods of dihydrochalcone

    图 3  目标化合物4a4n的合成路线

    Figure 3.  Synthesis route of target compound 4a—4n

    图 4  二氢查尔酮结构−降血糖活性关系

    Figure 4.  Structure- hypoglycemic activity relationship of dihydrochalcone

    表 1  化合物4n的安全性评估

    Table 1.  Safety assessment of compound 4n

    组别24 h受试鱼死亡率/%48 h受试鱼死亡率/%72 h受试鱼死亡率/%96 h受试鱼死亡率/%
    空白组 0 0 0 0
    溶剂对照组DMSO 0 0 0 0
    质量浓度1(0.1 mg/L) 0 0 0 0
    质量浓度2(1.0 mg/L) 0 5 10 20
    质量浓度3(10.0 mg/L) 10 10 30 50
    质量浓度4(25.0 mg/L) 20 30 60 80
    质量浓度5(50.0 mg/L) 50 60 80 100
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    表 2  目标化合物的降糖活性

    Table 2.  Hypoglycemic activity of target compounds

    结构分组葡萄糖消耗量均值/(mmol·L−1标准差P
    正常4.100.02
    胰岛素5.160.080.005
    4a4.180.060.321
    4b4.510.210.194
    4c4.300.110.206
    4d4.430.110.095
    4e4.220.340.762
    4f3.910.340.626
    4g3.880.090.131
    4h3.810.290.412
    4i3.750.190.208
    4j4.390.080.074
    4k4.290.190.430
    4l4.370.200.307
    4m4.150.020.152
    4n4.640.030.003
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出版历程
  • 收稿日期:  2019-12-02
  • 录用日期:  2020-01-18
  • 网络出版日期:  2020-02-11
  • 刊出日期:  2020-05-01

天然二氢查尔酮类衍生物的合成及降糖活性筛选

    作者简介:刘福俊(1994−),女,云南人,硕士生,主要从事药物合成研究. E-mail:2414861145@qq.com
    通讯作者: 王芳, wangfang@mail.kib.ac.cn
    通讯作者: 黄超, huangchao@ynu.edu.cn
  • 1. 云南民族大学 化学与环境学院, 生物基材料绿色制备技术国家地方联合工程研究中心, 云南省高校智能超分子化学重点实验室,云南 昆明 650503
  • 2. 中国科学院 昆明植物研究所,云南 昆明 650201
  • 3. 云南大学 生命科学学院,云南 昆明 650091

摘要: 从天然二氢查尔酮降糖物质出发,设计合成二氢查尔酮类衍生物并筛选其降糖活性. 以廉价易得的苯甲醛、苯乙酮衍生物为原料,经两步反应制得14个二氢查尔酮类化合物(其中 6 个新化合物),其结构经1H NMR、13C NMR、HRMS及IR表征. 以胰岛素为阳性对照药,通过脂肪细胞模型葡萄糖消耗量试验检测目标化合物的降血糖活性. 研究结果显示,新化合物 4n 降血糖活性最为显著,其葡萄糖消耗量为4.64 mmol·L−1,与正常组相比提高了13.11%. 文章为探讨二氢查尔酮化合物的制备和降糖构效关系提供了实验基础.

English Abstract

  • 天然产物一直是药物分子设计和开发过程的源泉,来自于天然产物的临床用药目前拥有难以替代的地位[1]. 云南素有植物王国之称,复杂的自然地理环境和丰富的生物多样性资源,造就了许多临床用药来自于道地天然药材的提取物,例如昭通天麻、文山三七、怒江重楼、铁皮石斛、龙血竭等.目前对天然提取物的关键活性物质进行人工合成和开发,是绿色可持续发展的重要方向,同时也是推动中药现代化的重要途径之一.

    龙血竭作为云南传统名贵药材代表之一,具有活血化瘀、镇痛消炎、抗氧化、抗肿瘤等活性,临床应用广泛[2]. 近年我们课题组对龙血竭中关键黄酮组分进行了研究[3-4],发现龙血竭的提取物具有治疗糖尿病及其并发症的功效[5]. 由于糖尿病是一种慢性疾病,现已成为第三类人类健康杀手,目前治疗糖尿病的药物有坎格列净[6]、西格列汀[7]、阿卡波糖[8]等,但此类药物易引起鼻咽炎、低血糖、尿酸升高等副作用,所以开发新型降糖药物迫在眉睫. 我们从天然龙血竭中寻找降糖物质探究活性规律,为降糖新药开发提供重要探索.

    黄酮作为龙血竭的主要活性成分,占龙血竭总成分的60%~70%,如二氢查尔酮类衍生物龙血素A、龙血素B及剑叶龙血素A等[9]. 二氢查尔酮类化合物含1, 3-二苯基丙酮基本骨架(图1),其作为查尔酮家族的主要成员,广泛存在天然植物、茶叶、水果等中,具有降血糖、抗氧化、抗肿瘤等活性[10]. 以二氢查尔酮为先导物进行的结构修饰、全合成和半合成研究是目前药物研究的热点,其中根皮苷[11]、阿司巴汀[12]、戴维迪宁[13]等具有优越的降血糖活性,但由于在植物中的含量和来源有限,限制了其应用. 设计合成天然二氢查尔酮类衍生物并筛选降糖活性,进而揭示其降糖物质构效关系,成为开发天然查尔酮类化合物和寻找降糖新药的重要途径.

    图  1  二氢查耳酮类降血糖药物及合成设计

    Figure 1.  Dihydrochalcone hypoglycemic drugs and its synthisis route design

    1996年Tsujihara等[14]以根皮苷结构为前体,设计了一系列以二氢查尔酮为基本骨架的根皮苷衍生物,发现在B环4位引入羟基或甲氧基时,具有最强的降血糖活性,在此基础上,B环2位或3位也有甲氧基或羟基取代则活性降低. 在B环2位和3位同时引入甲氧基则无降血糖活性,而在A环4位是否有羟基则对降血糖活性没有太大影响. 目前以二氢查尔酮类化合物作为降糖药的作用机理和构效关系尚不明确. 因此,我们以苯乙酮和苯甲醛为原料合成查尔酮,进而对其进行改造,设计合成一系列二氢查尔酮衍生物,以期获得降糖活性物质(图1).

    目前合成二氢查尔酮类化合物的方法较多,已报道的方法主要有2种:一是黄烷的转化;二是查尔酮类化合物的还原. 2003年,Eddarir等采用芳基卤化物和芳基硼酸为原料,合成了二氢查尔酮化合物[15];2014年,Yi等以黄烷为原料,HAuCl4@UiO-66-NH2材料结合Au(Ⅲ)作为催化剂,获得一系列二氢查尔酮化合物[16]; 2018年,Renaud等以查尔酮为原料,带富电子的环戊二烯酮配体的三羰基铁配合物为还原剂,得到二氢查尔酮类化合物[17]图2).

    图  2  二氢查尔酮合成方法

    Figure 2.  Synthesis methods of dihydrochalcone

    为寻找新型二氢查尔酮类降糖化合物,本文探索以温和高效的方法合成二氢查耳酮,对其进行衍生化合成并筛选降糖活性和评价安全性,获得了初步活性构效关系. 基于课题组前期工作基础[18-19],以廉价易得的苯甲醛和苯乙酮为原料,采用Pd/C和甲酸铵作为氢源,室温搅拌,经克莱森−斯密特缩合和优化的还原反应,两步制得14个二氢查尔酮类化合物(4a ~ 4n),其中4b4d4g4k4l4n为新化合物(图3). 所有化合物结构经1H NMR、13C NMR、HRMS及IR表征. 本研究选择建立体外细胞模型,通过脂肪细胞模型葡萄糖消耗量试验筛选其降糖活性,并经斑马鱼试验对新化合物4n进行了安全性评价.

    图  3  目标化合物4a4n的合成路线

    Figure 3.  Synthesis route of target compound 4a—4n

    • FA1004电子分析天平(上海天平仪器厂);X−5 LED显微熔点测定仪控温型(北京泰克仪器有限公司);NICOLET iS10傅里叶红外光谱仪(美国Thermo Fisher Scientific公司); LTQ Orbitrap XL高分辨质谱仪(美国Thermo Fisher Scientific 公司);BRUKER AV Ⅲ−400核磁共振仪(美国BRUKER 公司);CO2培养箱和超净工作台(美国Thermo公司);倒置相差显微镜(日本NIKON公司);酶标仪(瑞士TECAN公司);鱼缸.

      实验所用试剂均为市售分析纯、色谱纯(探索、阿拉丁生化科技股份有限公司). 3T3−L1脂肪细胞和L6骨骼肌细胞(ATCC),DMEM高糖和低糖培养基(Hyclone),新生牛血清(GIBCO),胎牛血清(GIBCO),青霉素/链霉素(BI),IBMX(SIGMA),胰岛素(Roche),地塞米松(Adamas),牛血清白蛋白(上海生工生物有限公司)、葡萄糖检测试剂盒(上海荣盛生物有限公司),供试斑马鱼.

    • 综合文献合成方法[20],将5 mmol苯甲醛衍生物(2a~2n)、1.25 mmol氢氧化钠加入到5 mL乙醇−水 体积比5:1的溶剂中,常温搅拌至完全溶解,再加入5 mmol苯乙酮衍生物(1a~1n),薄层色谱监测至反应完毕. 将反应物过滤,水洗,真空干燥,得化合物3b~3d, 3f~3n. 化合物3a和3e通过柱层析获得(化合物3a~3n实验数据见支撑文件).

    • 将1 mmol查尔酮3a~3n加入到乙醇和丙酮的混合溶剂中,常温搅拌使其完全溶解,再依次加入6 mmol甲酸铵,0.125 g 10% Pd/C,常温下反应,薄层色谱监测至反应完全,过滤除去10% Pd/C,滤液减压浓缩,随后加适量的丙酮溶解,过滤除去多余的甲酸铵,收集滤液,减压浓缩,进行柱层析[21],得化合物4a~4n(化合物4a, 4c, 4e, 4f, 4h, 4i, 4j, 4m实验数据见支撑文件).

      4'-甲基-2,4-二甲氧基二氢查耳酮 (4b): 黄色晶体;收率65.19%;熔点: 87.6~88.3 ℃; 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ:7.85 (d, J = 8.08 Hz, 2H, Ph-H), 7.30 (d, J = 7.92 Hz, 2H, Ph-H), 7.06 (d, J = 8.24 Hz, 1H, Ph-H), 6.51 (s, 1H, Ph-H), 6.42 (q, J = 5.96 Hz, 1H, Ph-H), 3.76 (s, 3H, OCH3), 3.72 (s, 3H, OCH3), 3.16 (t, J = 7.32 Hz, 2H, CH2), 2.80 (t, J = 7.76 Hz, 2H, CH2), 2.36 (s, 3H, OCH3); 13C NMR (100 MHz, DMSO) δ:199.1, 159.1, 158.0, 143.4, 134.2, 129.9, 129.3, 128.0, 121.0, 104.4, 98.4, 55.3, 55.1, 38.4, 24.3, 21.2; IR (KBr) (νmax, cm−1): 2 997, 2 935, 2 836, 1 678, 1 609, 1 586, 1 505, 1 039, 823, 645, 557; HRMS (ESI-TOF) m/z:Calcd for C18H21O3+ [M+H]+ 285.148 5, found 285.148 3.

      4'-氯-2,4-二甲氧基二氢查耳酮 (4d): 白色晶体;收率 70.26%;熔点: 78.5~78.8 oC; 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ:7.95 (d, J = 8.4 Hz, 2H, Ph-H), 7.55 (d, J = 8.4 Hz, 2H, Ph-H), 7.05 (d, J = 8.24 Hz, 1H, Ph-H), 6.50 (s, 1H, Ph-H), 6.42 (q, J = 6.24 Hz, 1H, Ph-H), 3.74 (s, 3H, OCH3), 3.71 (s, 3H, OCH3), 3.18 (t, J = 7.4 Hz, 2H, CH2), 2.79 (t, J = 7.6 Hz, 2H, CH2); 13C NMR (100 MHz, DMSO) δ:198.6, 159.2, 157.9, 138.0, 135.3, 129.9, 129.8, 128.8, 120.8, 104.4, 98.3, 55.3, 55.1, 38.5, 24.1; IR (KBr) (νmax, cm−1): 3 095, 3 009, 2 965, 2 925, 2 857, 1 682, 1 613, 1 586, 1 504, 976, 923, 844, 825, 791, 770, 631, 566, 525; HRMS (ESI-TOF) m/z:Calcd for C17H18O3Cl+ [M+H]+ 305.093 9, found 305.093 5.

      4'-异丙基-2,6-二甲氧基二氢查耳酮 (4g): 白色晶体;收率 70.89%;熔点: 83.9~84.4 oC; 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ:7.89 (d, J = 8.24 Hz, 2H, Ph-H), 7.38 (d, J = 8.2 Hz, 2H, Ph-H), 7.16 (t, J = 8.32 Hz, 1H, Ph-H), 6.62 (d, J = 8.36 Hz, 2H, Ph-H), 3.74 (s, 6H, OCH3), 3.00 (q, J = 6.8 Hz, 2H, CH2), 2.94 (q, J = 6.88 Hz, 1H, CH), 2.86 (t, J = 8.72 Hz, 2H, CH2), 1.21 (d, J = 6.92 Hz, 6H, CH3); 13C NMR (100 MHz, DMSO) δ:199.3, 157.7, 153.9, 134.3, 128.2, 127.3, 126.6, 116.2, 103.9, 55.6, 37.8, 33.4, 23.5, 18.4; IR (KBr) (νmax, cm−1): 2 963, 2 936, 2 900, 2 837, 1 679, 1 591, 975, 828, 773, 715; HRMS (ESI-TOF) m/z:Calcd for C20H24O3Na+ [M+Na]+, 335.161 5, found 335.161 8.

      4'-甲基-2,4,6-三甲氧基二氢查耳酮 (4k): 白色晶体;收率 75.63%;熔点: 76.9~77.2 oC; 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ:7.84 (d, J = 8.12 Hz, 2H, Ph-H), 7.31 (d, J = 7.88 Hz, 2H, Ph-H), 6.21 (s, 2H, Ph-H), 3.75 (s, 3H, OCH3), 3.73 (s, 6H, OCH3), 2.95 (t, J = 7.2 Hz, 2H, CH2), 2.78 (t, J = 8.4 Hz, 2H, CH2), 2.36 (s, 3H, CH3); 13C NMR (100 MHz, DMSO) δ:199.5, 159.4, 158.3, 143.3, 134.0, 129.3, 128.1, 108.5, 90.8, 55.6, 55.2, 38.3, 21.1, 18.2; IR (KBr) (νmax, cm−1): 2 996, 2 945, 2 839, 1 675, 1 605, 1 058, 1 038, 970, 948, 803, 772, 634; HRMS (ESI-TOF) m/z:Calcd for C19H23O4+ [M+H]+, 315.158 8, found 315.159 1.

      4'-异丙基-2,4,6-三甲氧基二氢查耳酮 (4l): 黄色晶体;收率 71.49%;熔点: 91.8~92.1 oC; 1H NMR (400 MHz, DMSO, ppm) δ:7.87 (d, J = 8.16 Hz, 2H, Ph-H), 7.37 (d, J = 8.08 Hz, 2H, Ph-H), 6.21 (s, 2H, Ph-H), 3.75 (s, 3H, OCH3), 3.73 (s, 6H, OCH3), 2.96 (t, J = 7.0 Hz, 2H, CH2), 2.92 (d, J = 9.52 Hz, 1H, CH), 2.78 (t, J = 8.6 Hz, 2H, CH2), 1.21 (d, J = 6.92 Hz, 6H, CH3); 13C NMR (100 MHz, DMSO) δ:199.5, 159.4, 158.3, 153.9, 134.4, 128.2, 126.6, 108.5, 90.8, 55.6, 55.2, 38.3, 33.5, 23.5, 18.2; IR (KBr) (νmax, cm−1): 2 998, 2 963, 2 843, 2 398, 1 681, 1 605, 976, 949, 842, 800, 780, 621; HRMS (ESI-TOF) m/z:Calcd for C21H27O4+ [M+H]+, 343.189 9, found 343.190 4.

      4'-氯-2,4,6-三甲氧基二氢查耳酮 (4n): 白色晶体;收率 70.78%;熔点: 110.9~111.8 oC; 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ:7.94 (d, J = 8.44 Hz, 2H, Ph-H), 7.57 (d, J = 8.4 Hz, 2H, Ph-H), 6.20 (s, 2H, Ph-H), 3.75 (s, 3H, OCH3), 3.71 (s, 6H, OCH3), 2.98 (t, J = 7.25 Hz, 2H, CH2), 2.78 (t, J = 8.28 Hz, 2H, CH2); 13C NMR (100 MHz, DMSO) δ:199.0, 159.5, 158.3, 137.9, 135.1, 129.9, 128.8, 108.2, 90.7, 55.6, 55.2, 38.4, 18.1; IR (KBr) (νmax, cm−1): 2 947, 2 823, 1 691, 1 590, 1 501, 975, 949, 835, 807, 778, 643; HRMS (ESI-TOF) m/z:Calcd for C18H20O4Cl+ [M+H]+, 337.140 0, found 337.101 5.

    • 将3T3−L1前脂肪细胞接种于10 cm或6 cm细胞培养皿中,用含10%新生牛血清和1%青霉素/链霉素的高糖DMEM培养液在37 oC、10% CO2条件下培养,待细胞长满融合后加入含0.5 mmol·L−1 IBMX、1 μmol·L−1地塞米松、170 nmol·L−1胰岛素、10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素的高糖DMEM诱导分化72 h,再用含170 nmol·L−1胰岛素和10%胎牛血清的DMEM继续培养24 h. 显微镜下观察细胞90%以上呈脂肪细胞表型,即可用于后续实验. 进行葡萄糖消耗实验时,将分化好的3T3−L1细胞消化并接种到96孔板中,过夜培养. 待细胞贴壁后,去除培养液,用PBS将细胞清洗一次,在相应的孔中加入含有DMSO、胰岛素(100 nM)或化合物4a~4n(10 μmol/L)的新鲜培养液,每孔200 μL,每组设3个重复孔. 经过24 h孵育后,吸取细胞培养基上清液,用商品化葡萄糖含量检测试剂盒进行葡萄糖的浓度测定. 各孔葡萄糖消耗量计算公式为:

      葡萄糖消耗量(mmol·L−1)=空白孔葡萄糖浓度-药物处理孔葡萄糖浓度.

    • 选择斑马鱼作为毒理模型,对新化合物4n进行安全性评估. 按照中华人民共和国国家标准《水质 物质对淡水鱼(斑马鱼)急性毒性测定方法》进行测定. 将斑马鱼驯养两周,定期喂食,实验前2 d开始禁食,选择活跃的鱼为受试鱼. 通过化合物4n 100%致死最低质量浓度(50.0 mg/L)及100%存活的最高质量浓度(1.0 mg/L)确定正式实验的浓度范围,选择5个质量浓度(1.0, 5.0, 10.0, 25.0, 50.0 mg/L)为正式实验的质量浓度组. 设立空白组及溶剂组(1% DMSO)为对照组,每组12尾,期间不喂食,不充氧. 观察1、3、7、24、48、72 h和96 h斑马鱼的死亡情况(表1).

      组别24 h受试鱼死亡率/%48 h受试鱼死亡率/%72 h受试鱼死亡率/%96 h受试鱼死亡率/%
      空白组 0 0 0 0
      溶剂对照组DMSO 0 0 0 0
      质量浓度1(0.1 mg/L) 0 0 0 0
      质量浓度2(1.0 mg/L) 0 5 10 20
      质量浓度3(10.0 mg/L) 10 10 30 50
      质量浓度4(25.0 mg/L) 20 30 60 80
      质量浓度5(50.0 mg/L) 50 60 80 100

      表 1  化合物4n的安全性评估

      Table 1.  Safety assessment of compound 4n

    • 两步反应均在常温下进行,且后处理简单. 第一步反应结束,只需水洗即可获得高产率化合物3a~3n;第二步反应查尔酮3a~3n在甲酸铵与10% Pd/C共同作用下,还原得化合物4a~4n,该过程借鉴文献[22]. 该反应过程对Pd/C的用量及反应温度等均有较高的要求,Pd/C用量过少会使反应时间延长,而用量过多则造成浪费且反应产率下降,反应温度过高则使反应复杂化. 因此,控制Pd/C的量(0.4当量)及反应温度(室温)是实现加氢还原的关键.

    • 活性实验结果如表2所示,我们分析得出14个目标化合物中4a~4e4j~4n葡萄糖消耗量均大于正常组(4.10 mmol·L−1),显示一定的降糖活性趋势. 其中化合物4n处理组葡萄糖消耗量为4.64 mmol·L−1,与正常组相比提高了13.11%,显示出显著降糖活性(P<0.005),该化合物具有抗糖尿病活性研究价值,将在今后的工作中进一步研究探讨.

      结构分组葡萄糖消耗量均值/(mmol·L−1标准差P
      正常4.100.02
      胰岛素5.160.080.005
      4a4.180.060.321
      4b4.510.210.194
      4c4.300.110.206
      4d4.430.110.095
      4e4.220.340.762
      4f3.910.340.626
      4g3.880.090.131
      4h3.810.290.412
      4i3.750.190.208
      4j4.390.080.074
      4k4.290.190.430
      4l4.370.200.307
      4m4.150.020.152
      4n4.640.030.003

      表 2  目标化合物的降糖活性

      Table 2.  Hypoglycemic activity of target compounds

      通过对表2结果进一步分析,得到如下结果:发现当在二氢查尔酮B环4位接入氯取代基的同时,在A环接入甲氧基或在A环和B环4位同时接入甲氧基时降血糖活性大大增强;在二氢查尔酮A环4位引入甲氧基,或引入甲氧基个数越多,则降血糖活性增强;当二氢查尔酮A环4位无取代基时,此类化合物基本无降血糖活性.

      综上所述,初步得到二氢查尔酮化合物4a~4n结构特征与降血糖活性之间构-效关系如图4所示.

      图  4  二氢查尔酮结构−降血糖活性关系

      Figure 4.  Structure- hypoglycemic activity relationship of dihydrochalcone

    • 当药物质量浓度<1.0 mg/L时,斑马鱼安全存活. 而质量浓度>50 mg/L时,鱼开始异常活跃,身体出现一些红色血丝,可能是充血所致,24 h时致死率达50%.

    • 基于天然二氢查尔酮降糖物质,本文设计合成了二氢查尔酮类衍生物并筛选其降糖活性. 以廉价易得的苯甲醛和苯乙酮为原料,简单高效的合成了14个二氢查耳酮衍生物. 通过活性筛选结果得到二氢查尔酮化合物4a~4n降糖活性的构效关系,新化合物4n具有较好的增加脂肪细胞葡萄糖消耗的活性,我们将进一步开展深入研究. 该工作为探索天然产物降糖成分,寻找新型降糖药物分子提供物质基础和实践探索.

      注:本文化合物3a~3m, 4a, 4c,4e,4f, 4h~4j, 4m波谱数据,4a~4n 1H NMR和13C NMR谱图等参见网络电子版附件.

参考文献 (22)

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